大鼠前牙移动后保持过程中在牙周组织压力侧的

复发是正畸临床常见问题，如何在微观分子领域探讨复发机制，对其进行干预或者加以利用，防止复发的出现，成为研究复发领域的热点。复发的过程可以理解为移动的过程，其中包含了骨形成及骨吸收，在此过程中有很多影响骨改建的因子参与其中，骨保护素 OPG( osteoprotegerin，OPG)[1]隶属肿瘤坏死因子家族，由成骨细胞分泌，是骨改建中骨吸收相关因子，其表达水平的变化与正畸保持有什么关系。对研究正畸复发又有什么意义。本实验通过研究保持期压力侧的OPGB表达，探讨骨改建机制，对临床保持时间的定制提供参考意义。

1 材料和方法

1.1 实验动物和分组 选择36只健康8周龄SD雄性大鼠，体重(200±20)g，随机分成6组，空白对照组与试验组5组。试验组大鼠前牙区加载40 g力10 d后，按保持时间进行分组，分为保持1、3、7、14及21 d组， 每组6只。

1.2 试验方法 试验组大鼠经10%水合氯醛注射液腹腔注射麻醉后，取仰卧位固定，加载制作好的单圈别针簧(图1)，推开中切牙间隙(图2)，期间按时观察矫治稳固情况，如有脱落及时重新加载。加力10 d后，除去加力装置，以0.3 mm结扎丝制作保持装置(图3)，保持中切牙推开间隙(图4)。

1.2.1 标本处理及HE染色 空白对照组于饲养7 d后，试验组分别于载力10 d后保持1、3、7、14、21 d予以处死，经4多聚甲醛经心脏灌注固定后，切取上颌骨组织(包含上颌牙列及周围骨组织)，在运用 EDTA脱钙剂对其脱钙5 d，采用常规的脱水处理及石蜡包埋后，沿中切牙长轴从颈部到根尖方向，将牙根的颈1/3部分做横向连续切片，每张厚约4 μm，实施 HE染色，显微镜下查看。

1.2.2 OPG表达的检测 采用免疫组织化学染色SABC法检测大鼠前牙牙周膜压力侧OPG的表达，在光镜下观察。阴性对照用PBS代替一抗工作液。

1.3 组织学观察及图像分析

1.3.1 OPG染色阳性标准 细胞形态完整，结构清晰，细胞胞浆呈特异性棕黄色，阳性细胞着色水平明显高于背景水平。

1.3.2 利用LEICA 显微镜观察及Biosens Digital Imaging Systems V1.6图像分析系统软件进行图像分析 光镜下对比观察各组牙周膜的HE切片。结合HE切片，观察OPG的免疫组织化学染色在牙周膜压力侧的表达分布及变化规律。每张切片均采集压力侧图像，随机选取5个高倍视野的平均灰度和阳性面积值，在统一光强度下测量阳性信号的积分光密度(integrated optical density，IOD)，然后运用统计学软件进行数据分析。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0统计学软件进行分析，全部数据均用均数±标准差表示，各组间差异采用单因素方差分析(one-way analysis of variance, one-way ANOVA)，用运用LSD分析方法比较各组之间的差异，α=0.05，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 OPG免疫组化染色结果

2.1.1 组织学观察 OPG阳性表达区，主要位于牙周膜内成骨细胞、骨衬里细胞、成纤维细胞和骨陷窝内的破骨细胞，阳性细胞胞浆呈特异性棕黄色。镜下观察发现，压力侧OPG阳性细胞主要为成纤维细胞及破骨细胞，其表达呈时间依赖性的下降趋势。保持14 d组压力侧阳性表达细胞数量及特异性染色强度基本接近空白对照组，保持21 d组牙周组织形态完全恢复正常，阳性细胞的数量及表达与空白对照组无差别(见附图5～11)。

表1 OPG阳性区平均积分光密度Group(组别)ADO(阳性区平均积分光密度)保持1d组155.保持3d组141.保持7d组124.保持14d组112.保持21d组113.对照组105.

2.1.2 OPG阳性区平均积分光密度 结果分析，大鼠前牙压力侧OPG的表达呈时间依赖性且表现为下降趋势；至保持14 d，OPG表达基本与空白对照组持平。见表1，图11。

2.2 统计学分析结果 单因素方差分析可见，组间比较F=106.486，P<0.05，各组数据之间存在差异，需要进一步统计。见表2。

表2 单因素方差分析(ANOVA)SumofSquaresdfMeanSquareFSig.组间比较.100 ..4860.000组内比较总体比较.

LSD统计学分析，实验组保持1、3、7、14 d组，组间比较P<0.05，提示差异有统计学意义；保持1、3、7 d组与对空白照组相比，P<0.05，差异有统计学意义；保持1、3、7 d组与保持21 d组比较，P<0.05，差异有统计学意义；保14、21 d组与空白对照组3组组间比较，P>0.05，差异无统计学意义，提示保持14、21 d组与空白对照组统计学上无差异。见表3。

表3 组间比较结果(LSD)(I)g(组别)(J)g(组别)均值标准误Sig.95%置信区间下限上限保持1d组保持3d组13...0007..3951保持7d组30...00024..4724保持14d组43.0..00037..2574保持21d组41...00036..9935对照组49...00043..3535保持3d组保持7d组17.0..0009..0134保持14d组29...00021..7984保持21d组28...00020..5345对照组35...保持7d组保持14d组12...0007..0218保持21d组11...0006..7579对照组18...00013..1179保持14d组保持21d组-1...633-6..9729对照组6.0..0230..3329保持21d组对照组7...0062..5968

文章来源：《水土保持通报》 网址: http://www.stbctbzz.cn/qikandaodu/2021/0722/761.html